血液中乙醇含量頂空氣相色譜法測定 目的 建立檢測血液中乙醇含量簡便、準確的方法。方法 以叔丁醇作為內標，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測器對樣品進行檢測，與平行操作的乙醇標準品比較，用內標法以乙醇對內標物的峰面積比進行定量。結果色譜圖上目標峰與內標峰分離完全，在0.01～10.0 g/L范圍內標準工作曲線線性關系良好。頂空氣相色譜法測定血液中乙醇含量快速靈敏，能準確定量，該方法可用于實際檢測分析。 

血液中乙醇濃度的高低,是判定一個人清醒程度的重要指標。目前國內大多采用國標法測定,即重鉻酸鉀氧化硫酸亞鐵銨滴定法。該法花費時間長,條件不易控制。由于血液中含有各種蛋白質和膠狀物質，比較黏稠,因此不能采用直接氣相色譜法測定。山東譜析儀器公司采用頂空氣相色譜法，通過對待檢血樣進行適當處理和色譜條件的摸索，從而對實驗方法有所改進。

1 材料和方法 

1.1 主要儀器 GC-17型氣相色譜儀（山東譜析科學儀器有限公司），AHS-6890A半自動頂空進樣器，N2010色譜工作站。 

1.2 試劑 空白抗凝血，無水乙醇(色譜純)，叔丁醇（色譜純，內標物）。 

1.3 試劑配置 

1.3.1 乙醇標準儲備液、叔丁醇標準儲備液 用移液器分別準確吸取無水乙醇1.26 ml（相對密度0.7893）、叔丁醇1.24 ml（相對密度0.803 7）于100 ml容量瓶中,用重蒸水稀釋至刻度,混勻，分別得濃度為10 g/L的乙醇標準儲備液、叔丁醇標準儲備液。置4℃冰箱保存（可保存1年） 

1.3.2 乙醇標準工作液、叔丁醇標準工作液 分別吸取一定量的乙醇標準儲備液和叔丁醇標準儲備液，用蒸餾水稀釋10倍，分別得濃度為1 g/L的乙醇標準工作液和叔丁醇標準工作。

1.4 色譜條件和頂空條件 色譜柱 毛細管色譜柱，柱溫80℃，檢測室溫度220℃，進樣溫度200℃. 頂空樣品溫度80℃，閥體溫度90℃，樣品管路溫度90℃。 

1.5 樣品制備 精確吸取2份待測全血0.5 ml，分別加入樣品瓶中,加100 μl(1 g/L)叔丁醇標準工作液作為內標，用密封鉗加封鋁帽，密封好瓶塞,混勻，放入DK-300頂空進樣器加熱位里面。 另取空白全血2份，根據待測血液中乙醇含量的多少（目測乙醇峰面積的大?。砑酉鄳囊掖紭藴使ぷ饕海?0 μg～2 mg），內標液按上述方法平行操作，作為已知對照。 

1.6 樣品檢測 按下頂空進樣按鍵，儀器自動負壓吸取樣品進氣相色譜分析，同時頂空進樣器給色譜工作一個采樣信號，色譜工作站開始記錄色譜數據。每個試樣進樣2次。 

1.7 標準曲線的制作 將10 g/L的乙醇標準儲備液用重蒸水分別稀釋10、100、1000倍，得濃度分別為1、0.1、0.01 g/L的乙醇標準液，然后分別取0.05、0.1、0.2、0.4 ml的1 g/L乙醇標準液，0.1、0.2 ml的0.1 g/L乙醇標準液，0.1、0.2 ml的0.01 g/L乙醇標準液，同時加入0.2 ml的1 g/L叔丁醇標準工作液做內標，檢測后制作標準工作曲線。 

1.8 記錄與計算 記錄檢材及已知對照中乙醇及內標峰面積值，填入GC定量分析記錄表中，并計算出各檢材中乙醇及內標的平均峰面積。表1 標準工作曲線相關數據 乙醇添加量理論計算的乙醇濃度根據表1的數據，計算標準曲線的回歸方程及相關系數： y=1.4062x+0.0268，r＝0.999 計算檢材中醇含量W(g/100 ml) W=f×檢材中的醇峰面積平均值×內標添加量（μg）×100檢材中內標峰面積平均值×檢材量×1000 f=空白檢材中醇添加量×內標峰面積平均值空白檢材中內標添加量×醇峰面積平均值 計算相對相差（用來檢驗平行操作的穩定性及數據的可靠性）： 相對相差（%）=｜W1-W2｜W×100 式中W1、W2為2份檢材平行定量測定的結果，W為2份檢材平均值。 

2 結 果 

2.1 測定的色譜圖  該條件下目標峰與內標分離完全，（3.39±0.5）min處為乙醇目標峰，（10.0±0.5）min處為內標峰。 

2.2 線性關系 在確定的最佳試驗條件下,對不同濃度的乙醇標準工作液進行測定,其回歸方程為y=1.4062x＋0.0268,r=0.999。在乙醇濃度為0.01～10.0 g/L范圍內，血液中乙醇含量與相應的峰面積值呈良好的線性關系，測定限為0.01 g/L。